DNA甲基化检测技术
在基于Bisulfite转化的DNA甲基化检测方法中,引物是决定实验成败的关键性因素,且视期望检测的目的基因片段的不同,适宜引物的存在与否有较大的不确定性,请尽量采用其可行性经过验证的引物,如因引物等
宿主菌TG1、XL-Blue1,辅助质粒VCSM13
提供噬菌体展示系统(宿主菌TG1、XL-Blue1,辅助质粒VCSM13、M13K07,噬菌粒载体pCANTAB5E、pComb3);
构建MTB突变菌株(基因敲除法)
采用噬菌体介导的同源重组进行基因敲除:首先构建同源交换位点(AES),随后将其整合到结核分枝杆菌噬菌体基因组,获得噬菌粒(phasmid);将噬菌粒导入耻垢分枝杆菌,获得整合有同源交换位点的重组噬菌体,经体外扩增获得高滴度的重组噬菌体,对结核分枝杆菌进行转染;