第52-63步 徕卡101 组织脱水、透明、浸蜡、包埋 从患者到病理学家，准备样本进行诊断需要细心、经验以及合理的流程。 徕卡特地为大家整理了取材、组织脱水、透明、浸蜡、包埋以及染色等（常规、特殊、IHC以及FISH）101步操作流程，帮助大家更有效、更简单地获得实验方案，避免错误的发生。 步骤五十二 使用精确的时间 🙆 正确：在染色程序中的每一步都需要是精确的时间。 🙅 错误：步骤时间染色要求是一致的，“如果染色时间有限”有些步骤被跳过，这可能产生不一致的结果。 这些组织是从同一个蜡块切下的相同厚度，使用的是相同的HE方法，只是由不同的工作人员手工染色。结果是：宏观上都可以看到不一致的染色结果。 步骤五十三 定期监测质量 🙆 正确：定期进行内参玻片染色，以监控染色质量。 🙅 错误：HE染色从不使用内参玻片，在染色出现问题时，很难确认是染色试剂，染色程序或固定不良的原因。 肾组织包括各种嗜酸细胞和保存完好的核组织元素，可以可靠的评估H染色质量。胎盘是另一种有效的阳性对照标本。 步骤五十四 规范化染色条件 🙆 正确：优化所有染色步骤：搅拌，洗涤和排水的时间。 🙅 错误：搅拌，洗涤和排水的时间不一致。溶剂和试剂迅速被污染。染色效果不一致。 使用自动染色仪的好处之一是搅拌、洗涤和排水时间是一致的。可保证其他变量的可控性，这将确保良好的，一致的染色结果。 步骤五十五 确保彻底脱蜡 🙆 正确：玻片脱蜡彻底。 🙅 错误：玻片脱蜡有时不完全或玻片包含残留蜡块。可能导致无法染色，或不均匀染色区域。 该HE染色切片显示整个左侧区域和部分几个较小的区域，部分染色或未染色。这是由于前期不完全脱蜡导致。 步骤五十六 定期更新试剂 🙆 正确：溶剂和染色剂被定期更换的频率，取决于处理的玻片染色或蜡块的数量。 🙅 错误：随机的更换溶剂和染色试剂。直到染色质量下降才会更换试剂。 很差的染色质量，苏木素染色效果很差，该试剂应立即更换。 步骤五十七 彻底水化 🙆 正确：玻片在苏木素染色之前需要彻底水化。 🙅 错误：苏木素溶液混入酒精或二甲苯，导致不均匀的染色。 该皮肤表皮的苏木素染色不均匀是由于残余的二甲苯（和蜡）引起的。 步骤五十八 苏木素质量监控 🙆 正确：因苏木精染色液会逐步被玻片和染色架携带的试剂稀释和继续氧化，故苏木素溶液的性能需要进行仔细的监控。 🙅 错误：苏木素染色能力是每天变化的并且无法知道变化规律的。例如，染色缸的表面面积，在染色过程中的通透程度，和周围的温度均可影响氧化速率。 同一蜡块切同样厚度的2张玻片，使用自动染色机，相同的程序，间隔七天H&E染色显示，即使是肉眼观察，染色效果的变化也是十分明显的。 步骤五十九 🙆正确：苏木精染色后，一般通过 Scott’s碱性自来水或氨水进行彻底的“返蓝”。此方法受当地自来水的自然PH值影响。 🙅 错误：有时由于未完全“返蓝”，细胞核会呈现粉红色。细胞核在苏木素未染（过分化）或伊红过染也可能呈现粉红色。 A.表皮细胞核的界限不清并被染成了粉红色。原因是苏木素染色后在碱性水中未恰当的“返蓝”（皮肤HE）。 B.苏木素染色后怡当“返蓝”的核染色效果。这幅图的核拥有更好的边界（皮肤，氢和电子）。 步骤六十 🙆正确：“返蓝”后的步骤需要非常彻底的清洗，以便去除自来水中残留的碱，以防止其中的碱阻碍后续伊红染色，引起染色淡或染色不均匀。 🙅 错误：不完全冲洗“返蓝”（清洗后留下的残余碱）使伊红染色变弱或不均匀。 剩余碱对伊红染色的影响。注意片状染色效果（脾HE）。 步骤六十一 伊红PH监测 🙆 正确：对伊红溶液的pH监测。保持最佳染色，保持PH5.0。加入醋酸可便捷的降低pH值。没有刻意监控伊红pH。 🙅 错误：当染色强度下降选择替换溶液（碱性自来水的携带带入能引起伊红溶液的pH上升）。 肺组织H&E染色，因伊红染色太弱，而不可接受的染色结果。请注意，只有红细胞部分被伊红染色。 地 址： 北京市朝阳区小营路17号一幢金盟大厦五层5-503室 联系人： 王女士 电 话： 010-64838766-237 传 真： 010-64842431/64838766/64838775-249 Email：wangqian@herosbio.com
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